中山大学硕士学位论文2006年 作者 朱建铭
论文摘要：
本文通过小鼠急性脑缺氧实验、大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO)损伤模型、对脑血流量影响实验、抑制血小板聚集及血栓形成实验、小鼠不完全脑 缺血模型、沙土鼠全脑缺血再灌注损伤等实验和模型，分别从扩张脑血管、抑制血小板聚集及血栓形成、抗水肿、抗缺血再灌注损伤、抗自由基和兴奋性氨基酸损伤 等角度，系统的研究了原人参三醇皂苷(PPT)对缺血性脑中风的防治作用及其机制。
方法
1.小鼠急性脑缺氧实验 小鼠i.p.给药，每天一次，共3次，末次给药后30min将小鼠逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间作为耐缺氧指标。
2.大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO)损伤模型 雄性SD大鼠，i.p.预防给药两次，每天一次，造模前O.5h i.v.给药1次，造模后4h和10h i.p.给药两次。模型建立：分离、结扎右侧颈总动脉，参照Berdson法用4-0尼龙线阻断大脑中动脉。造模成功能够存活24h的大鼠确定为最后实验 对象，并进行行为学评分后，快速取右脑，并切成三片，将脑前部用于脑含水量测定，中部用于脑梗死面积测定，后部用于病理组织学检查。
3.对脑血流量影响实验 犬静脉滴注给药，分别在给药前和给药后5、10、15、30、60、120以及180min测定平均动脉血压(MAP)、心率(HR)、脑血流量 (CBF)和脑血管阻力(CVR)等指标。
4．抑制血小板聚集及血栓形成实验 抑制血小板聚集：大鼠i.p.给药，共3次，每天1次。于末次给药30min后，分别自颈总动脉放血，在血样中加入5μl已稀释的ADP(终浓度为 50μmol／L)反应5min后测定最大聚集度。 抑制血栓形成：大鼠经4％戊巴比妥钠i.p.麻醉，舌下静脉给药后20min，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。把插入丝线的聚乙烯管的两端分别插入右侧 颈总动脉和左侧颈外静脉，打开动脉夹开放血液15min后，中断血流，迅速取出聚乙烯管中的血栓，在分析天平上称重，求出血栓抑制率。
5．双侧颈总动脉结扎的不完全脑缺血模型 给小鼠i.p.给药，共3次，每天1次；于末次给药后30min，麻醉后分离双侧颈总动脉，各组经尾静脉注射1％伊文思蓝溶液，并分别在注射10min后 结扎双侧颈总动脉。在结扎3h后断头取出脑组织，称重后测脑组织内伊文思蓝含量并计算脑指数。
6．沙土鼠全脑缺血再灌注损伤模型 采用结扎沙土鼠双侧颈总动脉15min再灌注24h制备全脑缺血再灌注损伤模型，动物随机分成假手术组、模型组、PPT 30mg／kg组、PPT 60mg／kg组、PPT120mg／kg组和阳性对照药血栓通注射液组。观察造模24h后PTS对沙土鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛 (MDA)、兴奋性氨基酸及病理组织学的影响。
结果
1．小鼠急性脑缺氧实验结果提示，PPT注射液30mg／kg以上剂量组给药后均能显著延长小鼠断头喘息时间，提示PTS注射液可提高小鼠脑耐急性缺氧的 能力以增强对抗脑中风的能力。
2．大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO)损伤模型实验提示：一定剂量的PPT注射液能改善MCAO大鼠的偏瘫体征，缩小脑内梗死面积，减轻脑水 肿和神经元细胞的继发性损害，对MCAO大鼠具有良好的防治作用。
3．脑血流量实验表明：12.3mg／kg、24.6mg／kg和49.6mg／kg剂量的PPT注射液在给药后30分钟内均能明显降低犬脑血管阻力，使 脑血流量显著增加，而对血压无明显影响，对心率影响也不明显，机制可能与扩张脑血管有关。
4．抑制血小板聚集及血栓形成实验提示，41.54 mg／kg和83.08mg／kg剂量的PPT注射液对ADP诱导的大鼠血小板聚集有明显的抑制作用，且随着剂量的增大抑制作用逐渐增强；抗血栓形成实验 提示，PPT注射液各剂量组能明显抑制大鼠血栓形成。
5．小鼠双侧颈总动脉结扎不完全脑缺血模型实验表明：与模型组比较， PPT注射液各组脑指数和脑伊文思蓝含量显著降低，提示一定剂量的PTS注射液可以抑制小鼠脑缺血引起的脑血管通透性增加，从而降低脑指数，减轻脑水肿。
6．PPT对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用 组织病理学检查表明，同模型组比较，PPT中、高剂量组对沙土鼠脑缺血再灌注致脑组织和神经细胞的病理损伤有较好的改善作用。 脑缺血再灌注24小时后沙土鼠脑组织SOD活性明显降低，MDA含量明显提高，与假手术相比较均有显著性差异。PPT给药组的SOD活性与与模型组相比显 著升高，MDA含量与模型组相比显著降低，提示PPT对沙土鼠全脑缺血再灌脑组织的自由基损伤有明显保护作用。 造模后模型组G1u和Asp明显升高，PTS各组升高值明显低于模型组，提示PPTS可抑制兴奋性氨基酸的释放，保护脑神经细胞。
结论 综合以上分析，结果提示一定剂量的PPTS对缺血性脑中风有明显的防治作用，其作用机制可能是扩张脑血管、抑制血小板聚集及血栓形成、减轻脑水肿以恢复脑血 流的供应，以及抵抗自由基和兴奋性氨基酸损伤以保护脑神经细胞。
